Аллергенность генетически модифицированных продуктов и кормов

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

1.5. Аллергенность

Пищевая аллергия является неблагоприятной реакцией на пищу и представляет собой важную проблему здравоохранения. Пищевая аллергия отличается от токсических реакций и непереносимости. Аллергия является патологическим отклонением иммунной реакции на определенное вещество, проявляющимся только у некоторых лиц в тех случаях, когда комбинированное воздействие изменений в окружающей среде и генетическая предрасположенность привели к аллергической сенсибилизации.

Иногда даже незначительное количество пищевого продукта, который хорошо переносится подавляющим большинством населения, может вызывать у аллергиков серьезные симптомы и смерть. Причиной, вызывающей неблагоприятное воздействие на здоровье, является не аллерген сам по себе, а болезненная реакция аллергика на аллерген.

Пищевая аллергия может быть вызвана различными иммунными механизмами. При этом IgE-опосредованная пищевая аллергия является основной формой пищевой аллергии, которая вызывает самые тяжелые реакции, и единственной формой, вызывающей опасные для жизни реакции. Данная IgE-опосредованная пищевая аллергия занимает центральное место в оценке риска аллергенности ГМО. Важно отметить, что пищевая аллергия состоит из двух отдельных фаз: первая фаза – сенсибилизация, на которой не проявляется никаких симптомов, в то время как способность иммунной системы реагировать резко возрастает, и следующая фаза – элиситация (провокация) с клиническими проявлениями.

При проглатывании аллерген(ы), то есть сенсибилизирующий пищевой продукт или пищевой компонент до определенной степени расщепляется пищеварительными энзимами, впитывается слизистой оболочкой кишечника (а в небольших количествах – даже слизистой оболочкой рта), перерабатывается в специализированных клетках иммунной системы и затем передается в реактивные иммунные клетки, в которых осуществляется иммунная реакция. Сенсибилизация также может возникать при контакте пищевого аллергена с кожей или при его вдыхании.

Большинство составляющих компонентов, которые вызывают аллергенность пищевых продуктов и пыльцы, являются белками. Некоторые продукты распада белка, то есть пептидные фрагменты, могут сохранять часть аллергенности нативного белка и, таким образом, могут также рассматриваться как аллергены.

Специфический риск аллергии ГМО связан с: (i) новым(и) экспрессированным(и) белком(ами), который(ые) может (могут) присутствовать в съедобных частях растений или в пыльце (данный вопрос связан с биологическим источником трансгена); и (ii) изменениями аллергенности цельного растения и его продуктов, например, вследствие сверхэкспрессии природных эндогенных аллергенов, возникающей как непреднамеренное последствие генетической модификации (данный вопрос связан с биологией самого растения-реципиента).

Более подробные руководящие указания для применения требований настоящего Раздела содержатся в научном заключении EFSA об оценке аллергенности генетически модифицированных растений и микроорганизмов, а также производных пищевых продуктов и кормов от 30 июня 2010 г. <*>

——————————–

<*> Бюллетень EFSA 2010; 8(7):1700.

 

1.5.1. Оценка аллергенности нового экспрессированного белка.

Аллергенность не является присущим и полностью предсказуемым свойством заданного белка, а представляет собой биологическую активность, вызывающую взаимодействие в организме лиц с наследственной генетической предрасположенностью. Таким образом, аллергенность зависит от генетического разнообразия и изменчивости организмов атопических лиц. Частота, тяжесть и специфика аллергических реакций также зависят от географических и экологических факторов. Учитывая невозможность полной предсказуемости, в оценке аллергенности необходимо принимать во внимание несколько аспектов для того, чтобы получить совокупное количество доказательств, которое сведет к минимуму любую неопределенность в отношении рассматриваемого(ых) белка (белков).

При изучении структурных характеристик, а также биологических и физико-химических свойств нового экспрессированного белка необходимо, чтобы структура и активность испытываемого белка были эквивалентными структуре и активности нового экспрессированного белка в генетически модифицированном растении. Проведение исследования с использованием очищенного целевого белка, полученного путем экспрессии в организмах, например, Escherichia coli, допускается при условии, что свойства микробиального заменителя белка являются идентичными свойствам белка, экспрессированного в растении, и при этом принимаются во внимание все посттрансляционные модификации, специфически возникающие в растении.

Заявитель должен проверить, является ли источник трансгена аллергенным. В тех случаях, когда введенный генетический материал получен из пшеницы, ржи, ячменя, овса или других соответствующих зерновых культур, заявитель также должен провести оценку новых экспрессированных белков в связи с их возможной ролью в выявлении глютензависимой энтеропатии или других энтеропатий, которые не являются IgE-опосредованными. На основе индивидуального подхода в каждом конкретном случае, когда события трансформации были соединены, заявитель должен представить оценку любой потенциальной возможности возникновения повышенной аллергенности у людей и животных. Данные потенциальные воздействия могут возникать в результате аддитивных, синергетических или антагонистических эффектов генных продуктов.

В оценке возможной аллергенности новых экспрессированных белков заявитель в каждом конкретном случае должен применять комплексный, индивидуальный подход, то есть подход, основанный на оценке всей совокупности имеющихся доказательств. Указанный подход должен включать:

(a) сравнение гомологии аминокислотной последовательности нового экспрессированного белка и известных аллергенов.

В каждом случае должен осуществляться поиск гомологий последовательности и/или структурных сходств экспрессированного белка и известных аллергенов с целью выявления потенциальной перекрестной реактивности IgE между новым экспрессированным белком и известными аллергенами. Заявитель должен обеспечить самый высокий и современный уровень качества и полноты баз данных. Минимальным требованием является критерий, основанный на выравнивании, при котором последовательность становится идентичной известным аллергенам на уровне 35% через интервал, составляющий, как минимум, 80 аминокислот. Должны быть представлены все использованные в анализе параметры выравнивания последовательностей, в том числе расчет процента идентичности (PID). Расчет PID должен осуществляться на интервале, состоящем из 80 аминокислот с включением пропусков таким образом, чтобы вставленные пропуски рассматривались как несовпадения. В некоторых случаях с целью оценки коротких пептидных фрагментов, таких как ORFs, может проводиться поиск последовательностей смежных идентичных или химически подобных остатков. Однако данный поиск не должен проводиться регулярно в целях идентификации потенциальных IgE-связывающих линейных эпитопов из-за его низкой чувствительности или специфичности;

(b) специальный скрининг сыворотки.

В тех случаях, когда есть признак гомологии последовательности или сходства структуры, важная процедура оценки потенциала воздействия новых экспрессированных белков, способных вызывать аллергическую реакцию у лиц, уже сенсибилизированных к перекрестно-реактивным белкам, основывается на исследованиях in vitro, предназначенных для измерения способности специфических IgE, содержащихся в сыворотке аллергиков, связывать исследуемый(ые) белок (белки). Существует межличностная изменчивость в специфичности и сходстве человеческой IgE-реакции. В частности, у аллергиков может варьироваться специфичность IgE антител к различным аллергенам, присутствующим в заданном пищевом продукте/источнике, и/или к различным эпитопам определенного белка. Для того чтобы оптимизировать чувствительность испытания, должны использоваться отдельные сыворотки, взятые от хорошо изученных аллергиков. Заявитель должен осуществлять специальный скрининг сыворотки в следующих случаях:

(i) когда источник введенного гена считается аллергенным, даже если не обнаружена гомология последовательности нового экспрессированного белка с известным аллергеном; либо

(ii) когда аллергенность источника не установлена, но имеются признаки взаимосвязи между новым экспрессированным белком и известным аллергеном на основе гомологии последовательности или сходства структуры.

Специальный скрининг сыворотки должен проводиться с отдельными сыворотками, взятыми от физических лиц с доказанной и хорошо изученной аллергией на источник или потенциальный перекрестно-реактивный аллерген, с использованием соответствующих иммунохимических испытаний. Анализы связывания IgE (например, радиологический иммуносорбентный анализ (RAST) или энзимный иммуносорбентный анализ (EAST), энзимно-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA) и электрофорез с последующим иммуноблоттингом с использованием специфических IgE-содержащих сывороток) являются подходящими методами;

(c) исследование устойчивости к пепсину и in vitro исследования перевариваемости пепсином.

Устойчивость к перевариванию протеолитическими энзимами уже давно считается характерным свойством аллергенных белков. Хотя было установлено, что не существует абсолютной корреляции, устойчивость белков к перевариванию пепсином является дополнительным критерием, который должен учитываться в оценке аллергенности при применении подхода, основанного на оценке всей совокупности имеющихся доказательств. Исследование устойчивости к пепсину обычно проводится в достаточно стандартизированных условиях при низких значениях pH и высоком соотношении пепсина к белку. Является признанным тот факт, что исследование устойчивости к пепсину не показывает физиологические условия переваривания. Перевариваемость новых экспрессированных белков специфическим контингентом населения, например, детьми и лицами с нарушенными функциями пищеварения, может быть оценена с помощью in vitro исследований перевариваемости при использовании различных условий. Кроме того, поскольку белок, кодированный новыми введенными генами, будет присутствовать в продукте как сложная матрица, влияние возможного взаимодействия между белком и другими компонентами матрицы, а также эффектов обработки должно приниматься во внимание при проведении дополнительных in vitro исследований перевариваемости. В зависимости от результатов in vitro исследований перевариваемости должна проводиться оценка сравнения связывания IgE с интактными, денатурированными нагреванием и переваренными пепсином белками, поскольку измененная перевариваемость может повлиять на аллергенность нового экспрессированного белка;

(d) дополнительные исследования.

Несмотря на то, что модели дополнительных исследований, включая клеточный анализ in vitro или исследования на животных in vivo, до настоящего времени не были валидированы для регулятивных целей, указанные исследования могут предоставить полезную дополнительную информацию, например, информацию о потенциале нового экспрессированного белка вызвать de novo сенсибилизацию.

1.5.2. Оценка аллергенности генетически модифицированных пищевых продуктов или кормов

В тех случаях, когда аллергенность растения-реципиента установлена, заявитель должен провести оценку любого потенциального изменения аллергенности генетически модифицированного пищевого продукта или корма путем сравнения спектра аллергенов с их природным аналогом. В частности, должна быть исследована потенциальная сверхэкспрессия природного(ых) эндогенного(ых) аллергена(ов) в генетически модифицированном растении.

В каждом конкретном случае заявитель должен применять индивидуальный подход в зависимости от имеющейся информации об аллергенном потенциале растения-реципиента. Это обычно осуществляется при помощи аналитических методологий, таких как протеомика, в сочетании с использованием сыворотки аллергиков в качестве проб. Взятая от хорошо клинически изученных аллергиков лиц сыворотка, являющаяся справочным материалом для целей исследования связывания IgE, может быть доступна в ограниченном числе и количестве. Для того чтобы свести к минимуму использование человеческой сыворотки, важная предварительная информация о вероятности непреднамеренного изменения общей аллергенности генетически модифицированного растения может быть получена путем использования сыворотки животных, экспериментально сенсибилизированных в четко определенных условиях, и путем включения соответствующих выявленных эндогенных аллергенов в сравнительный композиционный анализ.

Кроме того, во всех возможных случаях заявитель должен предоставлять информацию об уровне распространенности аллергии у лиц, работающих в сфере культивирования генетически модифицированного растения, соприкасающихся с культивированием или находящихся в непосредственной близости от мест культивирования указанного растения.

1.5.3. Адъювантность

Адъювантами являются вещества, которые при их одновременном назначении с антигеном повышают иммунную реакцию на антиген, а поэтому могут также повысить и аллергическую реакцию. В тех случаях, когда известный функциональный характер нового экспрессированного белка или структурное сходство с известными адъювантами указывают на наличие признаков возможной адъювантной активности, заявитель должен провести оценку возможной роли указанных белков в качестве адъювантов. Что касается аллергенов, то их взаимодействие с другими составляющими компонентами пищевой матрицы и/или обработки может изменить структуру и биодоступность адъюванта и таким образом модифицировать его биологическую активность.

1.5.4. Заключение оценки аллергенности

Заключение оценки аллергенности должно определять:

(a) существует ли вероятность того, что новый(ые) белок (белки) является(ются) аллергенным(и);

(b) существует ли вероятность того, что генетически модифицированный пищевой продукт или корм является более аллергенным, чем его природный аналог.

В тех случаях, когда по причине генетической модификации существует вероятность повышенной аллергенности, генетически модифицированный пищевой продукт или корм должны быть дополнительно охарактеризованы в свете их ожидаемого потребления (смотреть Раздел 2). Заявитель должен предложить надлежащие условия для размещения на рынке (такие, как постмаркетинговый мониторинг и маркировка).

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

No votes yet.
Please wait...

Просмотров: 19

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован.

*

code